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                技术干货 | 三血管阻塞模型的制作

                发布:深圳市瑞沃德生命科技有限公司
                浏览次数:148

                //  三血管阻塞模型


                急性脑缺血动物模型是研究脑血管病病理机制和防治措施不可江苏快三基本走势图带连线下载缺少的工具。由于临床上缺血性卒中大多是由于大脑江苏快三免费计划精准版中动脉区域梗死造成,因此人们普通采用血管内∩线栓法模型,但是〖由于该模型制作变异性大,而且动物长期存活率低,致使实验重复性差。

                后来经过学者们不断的摸索优化,发明了开颅后夹闭大脑中动脉(而非电凝)联合双侧颈总动脉夹闭的大鼠三血管阻塞模型(3-vessel occlusion, 3-VO) ,由于该方法可同时导致⊙大鼠皮质和基底节缺今天的江苏快三走势图 k3.icaile.com血,被认为是最接近江苏快三必出号最高多少期出的人类卒中的标准动物模型,适用于脑缺血后长期神经功能缺失的康复及※介入治疗研究中。另外,该模型因其缺血较为迅速、缺血效果江苏快三是赌博吗好、再灌注血流恢复迅速而○更加适用于急性缺血①性疾病的研究。

                激光散斑血流成像系统_瑞沃德

                检测效果图

                瑞沃德激光散斑血流成像系统监测效果


                //  动物选择

                ?小鼠:C57BL6J  CD-1等小鼠,常用雄性小鼠,体重25-35g

                ?大鼠:Sprague-Dawley(SD)、Wistar等多种小鼠,常用雄性大鼠,体重250~350g


                //  制作步骤

                1.大鼠手术操作步骤」


                ?将大鼠置于手术台上,取仰卧位,用10m注射器大小的管子放置在大鼠颈后,以◤加强双侧颈总动脉的显露。

                (1)剃掉颈部和腹侧的毛∴,用75%的乙醇棉球或聚维酮碘进行局部皮肤消毒,颈部中线做一个江苏快三多久开一期切口,分离双侧颈总动脉,双动脉下穿线江苏快三走势图表▆;分离颈总动脉时小心分离伴行的迷走神经纤维,以免╲受损伤。

                (3)将大鼠体位改为左侧卧位。

                (4)在大鼠右眼滴加1~2滴人工△泪液,闭上眼睑,避免手术中对眼睛造成损伤;剃掉右侧外耳道和右眼ㄨ外之间的皮毛,使用聚维酮碘局部皮肤消毒,75%乙醇脱碘,在两个位置连线中点做一切口,长度约2cm。

                (5)用止血钳拉开切口,切断颞肌,分离肌肉,暴露颧弓。操作工程中要注意保护腮腺和面神经。

                (6)用咬骨钳移除颧弓,用牵张器撑开下□ 颌骨与颧弓,暴露前庭窗;用1.4mm钻头的骨钻在前庭江苏快三怎窗的前3mm、下1mm处钻孔,钻头浸在室温的盐水中江苏快三开奖 走势图,以免在钻洞过程中造成皮质热或物理损伤。在显微镜◆下透过硬脑膜即可看见大脑中动脉,垂直于嗅束向上走ω行。

                (7)用针头●挑破硬脑膜,分离大脑中动脉周围的蛛网膜,暴露〗大脑中动脉。用显微镊在接近嗅束处将大脑中动脉挑起,用无创微动脉夹夹闭或尼龙线结扎大脑中动脉,夹闭结扎位置在其分支豆纹动脉¤之前或靠近颈内动脉ω 处。将颞肌和江苏快三大小技巧表面皮肤覆盖回位,用浸透人造脑脊液江苏快三必中计划的纱布覆盖。

                (8)在阻断大脑中动脉同时,通过尼龙线套扣阻断双侧颈卐总动脉的血流(见图1和图2)。

                (9)缺血1~2h后颈总动脉的动脉瘤夹/缝线和大脑中动脉的缝线都被松开,在显微镜下直接观♀察3个动脉血流的恢◎复。

                 (10)再灌注20min后,用牙科胶泥封闭颅骨手术,再分别缝合切口。允许大鼠麻醉苏醒后自由进食水。所有大鼠在能◥通风换气的(24±0.5)℃孵箱中直到】实验结束。


                三血管阻塞模型操作步骤

                图1三血管阻塞模型操作步骤


                (a)在左侧眼外眦至▼外耳道之间做长约2cm的切口;(b)暴露颞肌,纯性分离并牵开颞肌;(c)以卵圆窝或者下领神经前方3cm、侧方1cm的鳞骨≡为中心,钻一◤直径为2~4mm的小孔;(d)移去颅骨;(e)暴露大脑中动脉区域;(f)剪开需江苏快三3计划精准版扎闭区域周围硬脑膜,用10-0或11-0的带针缝合线结;大脑中动脉;(g)手█术示意图;(h)结扎双侧颈总动脉。


                三血管结扎江苏快三精准大小计划 www.8cr.cc示意图

                图2三血管结扎示意图


                注:双侧颈总动脉、右侧大脑中动脉结扎造成△大脑中动脉№区域持续、稳定的缺ㄨ血

                2.小鼠手术操作步骤


                小鼠的手术操作流程与大鼠基本相同,不同之处是用更小的动静脉畸形血管夹。

                手术器械基础包-大小鼠_瑞沃德

                瑞沃德手术器械□ 基础包-大小鼠


                // 注意事项及常见问题解一定牛江苏快三走势图答

                1.注意事项


                ?麻醉剂对梗死江苏快三大小一起买体积的作用

                在麻醉和手术过程中对大脑缺血模型都是√有影响的。麻醉剂在大脑◣缺血的病理生理中有重要作用。因此,笔者比较了不同麻醉剂对缺江苏快三和值规律血梗死体积的影』响,发现水合氯醛是●这模型的理想麻醉剂。

                水合氯醛是镇静剂,用于治疗失眠的短效药物,可缓解焦虑,在手术前诱导★睡眠或治疗乙醇戒断症状,也可¤用于术后缓解疼痛。用水合氯醛比用其他的麻醉药(如氯an酮、赛la嗪、乙mi和异fu醚)模型江苏快三计算公式的梗死体积和结扎时间有更好的相关性。水合氯醛的另一优点在于不是管制药品,在◣购买和存放时减少了很多限制要求。

                ?血糖对梗死体积的影响√

                在临床研究中发现,血糖〓水平是缺血脑损伤一个主要的决定因素。三血管MCAO模型也证实血糖水平对缺血结果有重要影响。高血糖导致梗死体积明显增大,并且高血糖是缺血期间最有害的因素,反之低血糖则能减少梗死◥体积。在治疗窗内使血糖恢复正常能有效≡减少梗死体积。

                然而,血糖对脑缺血作用的分子机制还不清楚。缺血前禁食24h能减少缺血24h后的脑损伤,这一作用持续至〇再灌注后28d。尽管COX-1基因治疗能▼在缺血24h后减少大脑梗▲死体积,但是在再灌注后的28d未见其持续的保护作用。这些结果均表江苏快三图标明血糖对缺血脑损伤有重要作用,且是评价缺血的远期预彩票江苏快三研究院后的一个重要因素。

                ?脑水肿对梗死体●积的影响

                在局灶性脑㊣缺血的动物模型中,通过特殊组织染色观察每一个脑片的江苏快三历史开奖梗死部位,通常通过测量这些梗死面积来确定梗死体积。

                形态学测@定分析梗死体积是一个客观并且定量的评估缺血脑损伤程】度的方法,同时这种方〒法在临床前的研究中常被用于判断神经保护剂的有效性。然而,肿胀的缺血组织可能导致测得的梗死区域增大,因此高估了实际的梗死体积。把脑水肿包括在梗死体积内计算可使实际的梗死体积增加多达22%。

                因此,因脑水肿引起的梗死体积失真可⊙能使得干预治疗爱彩乐江苏快三开奖结果的有效与否难以解释。可通过测量皮质的水含量和MRI确定在这一模型缺血损伤后的1~3d脑水肿的严重程度来减少因脑♀水肿导致的误差,Swanson等提出了一种基于正常存活的灰质体积来计算梗死体积的方◆法,这一方法进一步被林等证实。

                显然,以前直接测量梗死体积的方法在缺血后前3d脑水肿进展期间所测得的数据要高于实际梗死体积,这一误差能通过基于︼对非梗死皮质体积的间接测量得以减少。


                ?性别对梗死体积的影响

                流行病彩票江苏快三预测学研究发现,女性(直至绝经后,即55岁后)心血管病的患病率低于男性,卒中的发病》率也是如此。有短暂◣性缺血发作或小卒中的女性发病率低于男◆性。动物研究也表明性别不同,卒中的结果不同。在三血管MCAO模型中,雄性比雌性大鼠的梗死体积更大。当在三血管MCAO模型中▃混有雄性和雌性大鼠时,应该考虑性别的影响。


                ?温度↘对梗死体积的影响

                研究发现,即使是轻微的大脑温度降低,也能对缺血损伤的大脑起到保护作用。Connolly等的研究显示,MCAO模型后,小鼠无法自我调节╱体温,在保护期出现严重的〇低温,而这江苏快三昨日开奖结果种体温变化对MCAO模型后病理结果有显著的影响,是损伤了下丘脑体温调节中shu所致。


                2.常见问题及解决方江苏快三3同号遗漏数据法


                ?梗死面积太小

                在该模型中,选择ζ截断大脑中动脉主干血流的部分十分重▃要。实践经验认为只有在鼻裂间隙正上段部位的血流阻断江苏快三形态遗漏才能得到相对合适的梗死范围。


                ?损伤脑组∏织或出血

                在手术阻断大ξ脑中动脉主干时,电凝或结扎该血管都很容易造成邻近此血管的脑组织损伤,如果电凝不到位或结扎过于用力,或手术操作粗暴,都极易损伤大脑中动脉主干,从而导致大出血,使手术︽失败。


                *以上ξ 内容部分源自《实验卒中模江苏快三1ooo期型方法学》

                书号:ISBN 978-7-313-21776-9


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                2021-04-10
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